Vsebina
Barvanje po Gramu ali preprosto Gram je hitra in preprosta tehnika, katere namen je razlikovati bakterije glede na značilnosti njihove celične stene po izpostavitvi različnim barvilom in raztopinam.
Tako lahko z obarvanjem po Gramu poleg oblike bakterij preverimo tudi barvo, ki jo pridobijo, ta rezultat pa je pomemben za določanje drugih strategij za prepoznavanje bakterijskih vrst in za to, da zdravnik navede preventivno zdravljenje v skladu z mikroskopsko opažene značilnosti.
Obarvanje po Gramu se običajno izvaja v laboratoriju in je del izpita za bakterioskopijo. Razumeti, kaj je bakterioskopija in kako se to izvaja.
Kako se naredi madež po Gramu
Barva po Gramu je hitra, praktična in poceni metoda za prepoznavanje bakterij, odgovornih za okužbe, in je koristna za zdravnike, da nakažejo preventivno zdravljenje okužbe, ki se lahko pojavi, saj so znane posebne značilnosti teh skupin bakterij,
Barvanje po Gramu poteka v 7 glavnih korakih, vendar se protokol lahko razlikuje glede na laboratorij:
- Na drsnik položite nekaj kolonij bakterij in dodajte kapljico vode, da olajšate homogenizacijo kolonij;
- Pustite, da se malo posuši in rezilo lahko hitro preide skozi plamen, da se spodbudi sušenje, vendar je pomembno, da bodite pozorni na temperaturo, saj je pri previsoki temperaturi mogoče spremeniti strukturo bakterij, kar lahko moti rezultat izpit;
- Ko se stekelce posuši, ga pokrijemo z vijolično kristalnim barvilom in pustimo delovati približno 1 minuto;
- Diapozitiv speremo s tokom tekoče vode in ga pokrijemo z lugolom, katerega cilj je pritrditi modro barvilo, in pustimo delovati 1 minuto. Obe vrsti bakterij lahko absorbirata kompleks, ki ga tvorita barvilo in lugol, obarvajo modro;
- Nato diapozitiv sperite s tekočo vodo in nanesite 95% alkohola, tako da deluje 30 sekund. Alkohol je odgovoren za raztapljanje lipidne membrane, ki tvori gramnegativne bakterije, in tako odstrani kompleks, ki nastane med barvilom in lugolom, ter razbarva te bakterije. Vendar pa pri gram pozitivnih bakterijah alkohol dehidrira celično steno gram pozitivnih bakterij, zaradi česar se pore krčijo in postanejo neprepustne;
- Nato speremo v tekoči vodi in pokrov pokrijemo z drugim barvilom, fuksinom ali safraninom in pustimo delovati 30 sekund;
- Nato diapozitiv sperite pod tekočo vodo in pustite, da se posuši pri sobni temperaturi.
Takoj, ko se stekelce posuši, lahko damo kapljico potapljaškega olja in ga pod mikroskopom opazujemo s 100-kratnim objektivom, pri čemer je mogoče preveriti prisotnost ali odsotnost bakterij, pa tudi prisotnost kvasovk in epitelijskih celic.
Čemu je namenjena
Glavni cilj barvanja po Gramu je razlikovanje bakterij glede na značilnosti celične stene in splošno morfologijo. Tako lahko glede na značilnosti, opažene pod mikroskopom, bakterije razvrstimo v:
- Gram-pozitivne bakterije, ki jih vizualiziramo z modro barvo, ker jih alkohol ne razbarva, saj imajo debelejšo celično steno in se jim pore stisnejo, kadar so izpostavljene lugolu;
- Gram negativne bakterije, ki jih vizualiziramo z roza / vijolično barvo, ker jih razbarva alkohol in obarvajo safranin ali fuksin.
Po ogledu bakterij pod mikroskopom je možno, da bodo v laboratoriju opravljeni nadaljnji testi za identifikacijo vrste bakterije. Vendar pa lahko prek Grama in povezave z znaki in simptomi, ki jih predstavi oseba, zdravnik nakaže preventivno zdravljenje, dokler niso na voljo rezultati natančnejših preiskav, saj je tako mogoče zmanjšati stopnjo razmnoževanja bakterij in preprečiti zaplete.